蛋白質印跡法的步驟是什麼呢？

蛋白質印跡法是一種蛋白質檢測技術，最早是由美國人喬治.斯塔克發明的。它利用電泳技術把特定組織或細胞中的蛋白質分離出來，固定的NC膜或者PVDF膜上，再用特異性抗體檢測特定的抗原。正是能找到引起疾病的抗原，這種技術現在已被廣泛用於疾病診斷等多個生物領域。下面我們來看看它的豬蹄步驟。

一、原理

與Southern Blot或Northern Blot雜交方法類似，但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經過底物顯色或放射自顯影以檢測。

二、分類

Western Blot顯色的方法主要有以下幾種：

i. 放射自顯影

ii. 底物化學發光ECL

iii. 底物熒光ECF

iv. 底物DAB呈色

現常用的有底物化學發光ECL和底物DAB呈色，體同水平和實驗條件的是用第一種方法，發表文章通常是用底物化學發光ECL。只要買現成的試劑盒就行，操作也比較簡單，原理如下（二抗用HRP標記）：反應底物為過氧化物+魯米諾，如遇到HRP，即發光，可使膠片曝光，就可洗出條帶。測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術也廣泛應用於檢測蛋白水平的表。

三、樣品制備

1.單層貼壁細胞總蛋白的提取：

2. 組織中總蛋白的提取：

3. 加藥物處理的貼壁細胞總蛋白的提取。

蛋白質印跡法，一種找出基因表達錯誤引起的疾病的方法。這種快速能找的導致疾病的抗原，並且特異性抗體（一種蛋白質）被著色的優勢，在研究遺傳疾病，基因問題，疾病的檢測上運用很多。在其制作的基礎上，也在不斷發展出新的檢測技術，如Southern Blot雜交方法。